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多肽固相合成(chéng)(SPPS)和長(cháng)肽合成(chéng)的混合技術

多肽固相合成(chéng)是當今最流行的多肽合成(chéng)方法。C端的第一個氨基酸被(bèi)耦合在活化的載體(如聚苯乙烯)上。樹脂既可作爲c端保護基,同時又可將(jiāng)增長(cháng)的肽産品從在合成(chéng)過(guò)程中形成(chéng)的反應混合物中快速分離出來。

  • 多肽固相合成(chéng)(SPPS)
  • 成(chéng)功案例

我們經(jīng)常有客戶對(duì)超長(cháng)多肽的合成(chéng)咨詢,比如長(cháng)度在100到200個氨基酸的長(cháng)肽的合成(chéng),其實200個氨基酸已經(jīng)是屬于蛋白質的範疇了。成(chéng)功合成(chéng)169個氨基酸的蛋白證明我們的合成(chéng)技術在現有的技術平台是完全能(néng)勝任長(cháng)肽的合成(chéng)的,我們的技術平台PeptideSyn通常都(dōu)是合成(chéng)50個氨基酸以下的多肽,但是通過(guò)我們對(duì)多肽鏈接技術的改造和針對(duì)長(cháng)肽的創新,我們現在能(néng)成(chéng)功合成(chéng)蛋白質長(cháng)度的多肽。

通過(guò)化學(xué)合成(chéng)的辦法獲得長(cháng)達100到200個氨基酸的蛋白,比其它方法相比要跟快捷和便宜,況且化學(xué)合成(chéng)的蛋白是按照氨基酸的順序來進(jìn)行的,不會出現錯誤或者變異的情況。化學(xué)合成(chéng)還(hái)能(néng)加入一些别的辦法不能(néng)進(jìn)行的修飾,比如取代常規氨基酸爲D型氨基酸,增加某個位點的磷酸化或者甲基化。化學(xué)合成(chéng)還(hái)不需要額外增加純化蛋白用的标簽比如6HIS或者FLAG等。在蛋白表達的方法上,反而是基因合成(chéng),質粒構建,蛋白表達和純化等工作占據了絕大多數的時間和成(chéng)本。因此長(cháng)肽的化學(xué)合成(chéng)方法是廣大科研工作值得嘗試的途徑。

固相合成(chéng)和混合技術策略

優勢
  • 長(cháng)肽被(bèi)快速合成(chéng):Fmoc/Boc法
  • 生産周期短
  • 工藝自動化和高效性
  • 沒(méi)有需分離的中間體
劣勢
„
  • 原料成(chéng)本高,易造成(chéng)原料浪費。
  • 雜質較複雜:包括有插入、截斷、删除、被(bèi)修改或未被(bèi)修改的氨基酸。
  • „

成(chéng)功案例 1

成(chéng)功的在四周内合成(chéng)了一個169個氨基酸的多肽 (M.W. 18716.41, 83% purity)。多肽合成(chéng)的成(chéng)功率取決于多肽的序列,有時候150個氨基酸的多肽有時候比一個70個氨基酸的多肽更容易合成(chéng)。通常利用Boc/Bzl進(jìn)行氨基酸的保護對(duì)于長(cháng)的多肽會比較有幫助,由于多肽産品的切割需要比較強的酸比如TFMSA和HF,所以在去保護的時候有些有活性的中間産物很容易和一些氨基酸進(jìn)行反應,我們對(duì)原料和酸堿的選擇能(néng)很大程度的解決這(zhè)些問題,因此我們的PeptideSyn技術平台對(duì)于長(cháng)肽的合成(chéng)起(qǐ)到了突破性的作用。

HPLC Results

Peptide synthesis: Long peptide synthesis

Mass Spectrometry Results

Peptide synthesis: Long peptide mass spectrometry result

成(chéng)功案例 2

某客戶要求合成(chéng)一高度疏水的含68個氨基酸的多肽(純度爲85%),N端進(jìn)行FITC标記。此多肽在4周内成(chéng)功合成(chéng)。

HPLC Results

Peptide synthesis: FITC modification HPLC result

Mass Spectrometry Results

Peptide synthesis: FITC modification mass spectrometry result

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