熒光共振能(néng)量轉移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET)

熒光共振能(néng)量轉移（FRET)是一種(zhǒng)非輻射能(néng)量躍遷，通過(guò)分子間的電偶極相互作用，將(jiāng)供體激發(fā)态能(néng)量轉移到受體激發(fā)态的過(guò)程。此過(guò)程沒(méi)有光子的參與，所以是非輻射的。該分析方法具有快速、敏感和簡單等優點。

用于FRET試驗的染料是可以相同的。但在大多數應用中其實是使用不同的染料。簡單地說，熒光共振能(néng)量轉移是在供體基團的激發(fā)狀态下由一對(duì)偶極子介導的能(néng)量從供體(染料1)向(xiàng)受體(染料2)轉移的過(guò)程。通常，供體 （Donor）熒光基團的發(fā)射光譜要與受體（Acceptor）基團的吸收光譜有一定的重疊。當這(zhè)兩(liǎng)個熒光基團間的距離合适時（10 – 100 Å)），就可觀察到熒光能(néng)量由供體向(xiàng)受體轉移的現象。能(néng)量轉移發(fā)生方式依賴于受體的化學(xué)結構：

• a) 被(bèi)轉化爲分子的振動，即發(fā)生能(néng)量轉移熒光熄滅。(受體是猝光劑)
• b) 發(fā)射更強于受體本身的特征熒光，造成(chéng)次級熒光光譜的紅移。 (受體是熒光發(fā)射體)。

FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具，由于其反應過(guò)程可被(bèi)連續監測，爲酶活性的檢測提供了一個便捷的方法。供體/受體對(duì)的肽鍵水解後(hòu)産生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當FRET肽是完整的，表現出的是内部的熒光猝滅，但當供體/受體對(duì)的任何肽鍵斷裂就會釋放出熒光，此熒光可被(bèi)連續檢測，從而可對(duì)酶的活性進(jìn)行定量分析。

FRET 肽可作爲各類酶研究的合适底物，比如：

1. 肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動力特征和功能(néng)特征。
2. 對(duì)新的蛋白水解酶的篩選和檢測。
3. 對(duì)多肽折疊的構象研究。

以下是一些用于FRET的标準染料組合::

1. Fluorescein and Dabcyl:FAM/Lys(Dabcyl)
2. Fluorescein and Tamra: FAM/TAMRA
3. Methoxy-coumarin-acetic-acid(MCA) and 2,4-Dinitrophenyl(DNP): MCA/Lys(Dnp).
4. Ortho-aminobenzoic acid (Abz) and 2,4-dinitrophenyl (Dnp) or N-(2,4-dinitrophenyl)ethylenediamine (EDDnp): Abz/Tyr (NO2), Abz/EDDnp
5. Dabcyl and Glu(EDANS)

在蛋白酶的多肽底物内經(jīng)共振能(néng)量轉移引發(fā)熒光猝滅的供體-接受對(duì)

常規RET供體-接受對(duì)的福斯特臨界距離（Forster Critical Distance）

(1): 5-(2-iodoacetylaminoethyl)aminonaphthalene-1-sulfonic acid
(2): N-(4-dimethylamino-3,5-dinitrophenyl) maleimide
(3): carboxyfluorescein succinimidyl ester
(4): 4,4-difluoro-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indacene