載體蛋白KLH, BSA, OVA偶聯-多肽修飾

肽-載體蛋白偶聯多用于制備抗多肽類抗體，單獨的多肽通常太小不足以激起(qǐ)充分的免疫反應，而帶有很多抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細胞，進(jìn)一步誘導B細胞免疫反應。

請記住，免疫系統是將(jiāng)肽-蛋白作爲一個整體來激起(qǐ)免疫反應的，因而産生的抗體中有針對(duì)多肽的，有針對(duì)鏈接劑的，也有針對(duì)載體蛋白的。 其中最常見的載體蛋白有如下幾種(zhǒng):

• KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血藍蛋白，是在某些軟體動物、節肢動物(蜘蛛和甲殼蟲)的血淋巴中發(fā)現的一種(zhǒng)遊離的藍色呼吸色素。血藍蛋白含兩(liǎng)個直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類似，它易于氧結合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結合的銅蛋白，氧化時呈青綠色，還(hái)原時呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是最常被(bèi)選用的載體蛋白。



• BSA (Bovine Serum Albumin)，即牛血清白蛋白，屬于最穩定的和可溶的白蛋白。其分子量爲67 x 103 Da （含有59個Lys）。大約有30-35個主要氨基可用于與鏈接劑發(fā)生共轭反應, 使得BSA成(chéng)爲一種(zhǒng)很流行的弱抗原化合物載體蛋白。
  BSA的不利之處在于在很多實驗中，它被(bèi)當作封閉劑使用，如果多肽-BSA偶聯物的抗血清用于這(zhè)樣(yàng)的檢測分析中，通常會出現假陽性，因爲這(zhè)些血清含有抗BSA的抗體。



• OVA (Ovalbumin)，即雞卵白蛋白，分子量爲45 x 103 Da。它可作爲第二載體蛋白去驗證抗體是否特異性地隻針對(duì)多肽而并非載體蛋白(如BSA)。

巯基修飾(通過(guò)Cys的側鏈)用于與KLH、BSA或OVA發(fā)生共轭反應

所有攜帶巯基反應的功能(néng)基團經(jīng)修飾都(dōu)可被(bèi)用來發(fā)生共轭反應。其中最常見的有以下幾種(zhǒng):

• 碘乙酰胺（Iodoacetamide）
• 馬來酰亞胺（Maleimide）
• 烷基鹵（Alkyl halide）



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